Seroprevalencia de la infección por Trypanosoma cruzi en la población rural del estado Sucre, Venezuela / Seroprevalence of Trypanosoma cruzi infection in the rural population of Sucre State, Venezuela / Soroprevalência de infecção pelo Trypanosoma cruzi na população rural do Estado de Sucre, Venezuela

Resumen: El objetivo del presente estudio fue determinar la seroprevalencia de la infección por Trypanosoma cruzi en el estado Sucre (Venezuela) y su asociación con factores de riesgo epidemiológicos. El diseño muestral por conglomerados permitió seleccionar 96 centros poblados y 576 viviendas en los 15 municipios del estado. Asimismo, se evaluaron un total de 2.212 muestras de sueros, a través de las pruebas de ELISA, HAI e IFI. La seroprevalencia en el estado Sucre fue de 3,12%. Los factores de riesgo asociados a la infección por T. cruzi fueron: deposición de basura, materiales predominantes en el piso y paredes, tipo de vivienda, vivir en casas con paredes de bahareque y/o techos de palmas, vivir en casa con paredes y techos de riesgo, construcciones de riesgo y anexos de bahareque, aves dentro de la vivienda y la presencia de leña. La infección se encontró asociada a la edad de los individuos, se detectaron tres casos seropositivos en menores de 15 años. En el estado Sucre existen variables epidemiológicas que favorecen el riesgo a contraer la infección por T. cruzi.

Abstract: The current study aimed to determine the seroprevalence of Trypanosoma cruzi infection in Sucre State, Venezuela, and its association with epidemiological risk factors. The cluster sampling design allowed selecting 96 villages and 576 dwellings in the State's 15 municipalities. A total of 2,212 serum samples were analyzed by ELISA, HAI, and IFI. Seroprevalence in Sucre State was 3.12%. Risk factors associated with T. cruzi infection were: accumulated garbage, flooring and wall materials, type of dwelling, living in a house with wattle and daub walls and/or straw roofing, living in a house with risky walls and roofing, risky buildings and wattle and daub outbuildings, poultry inside the human dwelling, and presence of firewood. Infection was associated with individual age, and three seropositive cases were found in individuals less than 15 years of age. Sucre State has epidemiological factors that favor the risk of acquiring T. cruzi infection.

Resumo: O estudo teve como objetivo determinar a soroprevalência da infecção pelo Trypanosoma cruzi no Estado de Sucre, Venezuela, e a associação com fatores de risco epidemiológicos. O delineamento da amostragem em clusters permitiu a seleção de 96 vilarejos e 576 moradias nos 15 municípios do Estado. No total, 2.212 amostras de soro foram analisadas com ELISA, HAI e IFI. O estudo mostrou uma soroprevalência de 3,12% no Estado de Sucre. Os seguintes fatores de risco estiveram associados à infecção pelo T. cruzi: acúmulo de lixo, materiais de piso e paredes impróprios, tipo de moradia, moradias com paredes de pau-a-pique e/ou teto de palha, moradias em situação de risco e construções anexas feitas de pau-a-pique, aves dentro das moradias e presença de lenha. A infecção esteve associada à idade individual, e três casos soropositivos foram identificados em indivíduos com menos de 15 anos de idade. O Estado de Sucre apresenta fatores epidemiológicos que aumentam o risco de infecção pelo T. cruzi.

Nuevo método de evaluación del efecto antiparasitario en modelos in vitro e in vivo, a través de la visualización de Trypanosoma cruzi-GFP / New method of evaluation of the antiparasitic effect models in in vitro and in vivo, through the viewing of Trypanosoma cruzi-GFP

Los tratamientos de primera línea para la enfermedad de Chagas generan importantes efectos adversos que acentúan el deterioro de la salud en los pacientes. La necesidad de generar fármacos alternativos ha permitido desarrollar estudios donde se emplean parásitos capaces de expresar una proteína fluorescente, a fin de correlacionar fluorescencia con población de protozoarios. En este sentido, ideamos una metodología para el seguimiento de la proliferación de Trypanosoma cruzi-GFP (Green Fluorescent Protein) en modelos in vitro e in vivo, empleando el equipo iBox- UVP. Los ensayos in vitro se iniciaron con una curva de calibración usando concentraciones entre 5x105 y 5x107 parásitos/mL. Seguidamente, con una curva de proliferación evidenciamos a través de la fluorescencia la susceptibilidad de los parásitos frente a la droga comercial Benznidazol (IC50= 5,3±1,3 μM). En el ensayo in vivo se corroboró cualitativamente el efecto quimioterapéutico del Benznidazol (100 mg/kg/día) en ratones C57BL/6, partiendo de un inóculo de 2,5x105 parásitos, haciendo captura de imágenes de fluorescencia cada dos días a partir del día 1, e inicio del tratamiento por vía oral el sexto día. El coeficiente de correlación cercano a 1 obtenido en la curva de calibración habla de un método de cuantificación parasitario sencillo y robusto; también los ensayos en modelos in vitro e in vivo permitieron monitorear el efecto dosis-dependiente de Benznidazol sobre T. cruzi-GFP. En síntesis, elaboramos una metodología novedosa, rápida, no invasiva y que sigue en tiempo real la respuesta quimioterapéutica de drogas anti-T. cruzi.

The first-line treatments for Chagas disease generate significant adverse effects that accentuate the health deterioration in patients. The need to generate alternative drugs has led to the development of studies in which parasites will express a fluorescent protein, and correlate this expression with protozoan population. We devised a methodology for monitoring the proliferation of Trypanosoma cruzi- GFP (Green Fluorescent Protein) in models in vitro and in vivo, using the equipment iBox-UVP. In vitro assays were initiated with a calibration curve using concentrations between 5x105 and 5x107 parasites/mL. Subsequently, with a proliferation curve, through fluorescence we determined the susceptibility of the parasites against the commercial drug Benznidazol (IC50= 5,3±1,3 μM). In vivo assays corroborated qualitatively the chemotherapeutic effect of Benznidazol (100 mg/kg/day) in C57BL/6 mice, starting from an inoculum of 2.5x105 parasites, making capture of fluorescence imaging every two days from day 1, and starting oral treatment on the sixth day. The correlation coefficient close to 1 obtained in the calibration curve showed that this quantification method of parasites is simple and robust; assays in vitro and in vivo allowed monitoring dose-dependent effects of Benznidazol agains T. cruzi-GFP. We have produced an innovative, rapid, non-invasive method that monitors in real time the chemotherapeutic response of anti-T. cruzi drugs.

Production of a conjugate between the rK346 antigen from Leishmania infantum and the horseradish peroxidase C for the detection of rK346 antibodies / Producción de un conjugado entre el antígeno rK346 de Leishmania infantum y la peroxidasa C de rábano picante para la detección de anticuerpos rK346

It was designed and characterized a reporter system to be captured by antibodies bound to ELISA plates. The system was designed with the rK346 from Leishmania infantum, a highly antigenic and specific protein. The rK346 was coupled to the horseradish peroxidase C (HRPc) from Armoracia rusticana using glutaraldehyde or sulfo-SMCC. Glutaraldehyde conjugation was performed in two steps. Separation of conjugates was carried out using a Sepharose S-200 in size exclusion chromatography (SEC); fractions were analyzed via HRPc activity and through ELISA plates sensitized with polyclonal anti-rK346 IgG purified from rabbit serum. A heterogeneous population of conjugates rK346-HRPc was obtained with molecular weights ranging between 109.7 ± 16.5 to 67.6 ± 10.1 kDa; with rK346-HRPc stoichiometries of 1:2; 2:1; 3:1; and 2:2. Conjugation using sulfo-SMCC was carried out first by introducing -SH groups onto the HRPc using the SATA reagent and the antigen was modified with sulfo-SMCC during 45 min. Separation and analysis of conjugates was performed similarly as with glutaraldehyde, resulting in a heterogeneous population of conjugates rK346-HRPc with molecular weights between 150.5 ± 22.6 to 80.0 ± 12.0 kDa; with rK346-HRPC stoichiometries of 2:1; 1:2; 2:2; and 1:3, with an increased conjugation efficiency in comparison with glutaraldehyde. This enables sulfo-SMCC to be used as a potential reagent for coupling the antigen to the HRPc, to design an economic, specific and easy method to apply as a reporter system, available to assess individuals at risk and/or at early and late stages of visceral leishmaniasis.

Se diseñó y caracterizó un sistema reportero para ser capturado por anticuerpos enlazados a placas de ELISA. El sistema fue diseñado con una proteína altamente antigénica y específica, la rK346 de Leishmania infantum. La rK346 fue acoplada a la peroxidasa C de rábano picante (HRPc) de Armoracia rusticana usando glutaraldehido o sulfo-SMCC. La conjugación con glutaraldehido fue realizada en dos pasos. La separación de los conjugados fue llevada a cabo a través de una cromatografía de exclusión molecular sefarosa S-200 (CES), las fracciones fueron analizadas midiendo la actividad HRPc y por placas ELISA sensibilizadas con inmunoglobulina G policlonal anti-rK346, purificada desde suero de conejo. Se obtuvo una población heterogénea de conjugados rK346-HRPc en un rango de pesos moleculares entre 109,7 ± 16,5 a 67,6 ± 10,1 kDa; con estequiometria rK346-HRPc de 1:2; 2:1; 3:1; y 2:2. La conjugación usando sulfo-SMCC se llevó a cabo primero introduciendo grupos -SH en la HRPc usando el reactivo SATA; el antígeno se modificó con sulfo-SMCC. La separación y el análisis de los conjugados se realizaron de forma similar que con el glutaraldehido, resultando en una población heterogénea de conjugados rK346-HRPc con un rango de pesos moleculares entre 150,5 ± 22,6 a 80,0 ± 12,0 kDa; con estequiometria rK346-HRPC de 2:1; 1:2; 2:2 y 1:3, y con una eficiencia de conjugación incrementada en comparación con glutaraldehido. De esta forma, se habilitó al sulfo-SMCC como un reactivo potencial para acoplar antígenos a la HRPc, como método para el diseño de un sistema reportero económico, especifico y fácil de aplicar, útil en la evaluación de individuos en riesgo y/o en estados tempranos o avanzados de leishmaniasis visceral.

ADENOSINE DEAMINASE ACTIVITY AND SERUM C-REACTIVE PROTEIN AS PROGNOSTIC MARKERS OF CHAGAS DISEASE SEVERITY / Atividade da adenosina deaminase e níveis de proteina C reativa sérica como marcadores de gravidade na doença de Chagas

SUMMARY Chagas disease is a public health problem worldwide. The availability of diagnostic tools to predict the development of chronic Chagas cardiomyopathy is crucial to reduce morbidity and mortality. Here we analyze the prognostic value of adenosine deaminase serum activity (ADA) and C-reactive protein serum levels (CRP) in chagasic individuals. One hundred and ten individuals, 28 healthy and 82 chagasic patients were divided according to disease severity in phase I (n = 35), II (n = 29), and III (n = 18). A complete medical history, 12-lead electrocardiogram, chest X-ray, and M-mode echocardiogram were performed on each individual. Diagnosis of Chagas disease was confirmed by ELISA and MABA using recombinant antigens; ADA was determined spectrophotometrically and CRP by ELISA. The results have shown that CRP and ADA increased linearly in relation to disease phase, CRP being significantly higher in phase III and ADA at all phases. Also, CRP and ADA were positively correlated with echocardiographic parameters of cardiac remodeling and with electrocardiographic abnormalities, and negatively with ejection fraction. CRP and ADA were higher in patients with cardiothoracic index ≥ 50%, while ADA was higher in patients with ventricular repolarization disturbances. Finally, CRP was positively correlated with ADA. In conclusion, ADA and CRP are prognostic markers of cardiac dysfunction and remodeling in Chagas disease.

Introdução e objetivo . A Doença de Chagas é um problema de saúde pública mundial. A disponibilidade de ferramentas diagnósticas para prever o desenvolvimento de miocardiopatia chagásica crônica é fundamental para reduzir a morbidade e a mortalidade. Aqui estudamos o valor prognóstico da atividade sérica da adenosina deaminase (ADA) e dos níveis de proteína C reativa (PCR) em indivíduos chagásicos. Métodos : 110 indivíduos: 28 saudáveis e 82 pacientes chagásicos foram divididos de acordo com a gravidade da doença em fase I (n = 35), II (n = 29) e III (n = 18). Para cada indivíduo foram feitos uma história médica, eletrocardiograma, radiografia de tórax e ecocardiografía transtorácica. O diagnóstico de Chagas foi confirmado por ELISA e MABA utilizando antígenos recombinantes, a atividade sérica da enzima ADA foi determinada por espectrofotometria, e os níveis séricos de PCR por ELISA. Resultados : os níveis de PCR e da atividade da ADA aumentaram linearmente em relação à fase da doença, sendo a PCR significativamente maior na fase III, e a ADA em todas as fases. Além disso, PCR e ADA foram correlacionados positivamente com parâmetros ecocardiográficos de remodelamento cardíaco e alterações eletrocardiográficas, e negativamente com a fração de ejeção. PCR e ADA foram mais elevadas em pacientes com índice cardiotorácico ≥ 50%, enquanto que a ADA foi maior em pacientes com alterações da repolarização ventricular. Finalmente, os níveis de PCR foram correlacionados positivamente com a atividade da ADA. Conclusão : ADA e PCR são marcadores prognósticos de disfunção e remodelamento cardíaco na Doença de Chagas, e devem ser incluídos na avaliação e acompanhamento dos pacientes.

Estudio entomológico de vectores transmisores de la infección por Trypanosoma cruzi en la población rural del estado Sucre, Venezuela / Entomological study of Trypanosoma cruzi vectors in the rural communities of Sucre state, Venezuela

Introducción. Debido a los cambios ambientales y a la intervención del hombre en los espacios silvestres, se ha cambiado el nicho ecológico de los vectores reduvídeos. Objetivo. En el presente estudio se evaluó la situación actual de los índices entomológicos de los triatominos responsables de la transmisión de Trypanosoma cruzi en el estado Sucre. Materiales y métodos. Se llevó a cabo un estudio prospectivo transversal en 96 centros poblados y 576 viviendas de los 15 municipios del estado Sucre, Venezuela, entre agosto y noviembre de 2008. Los vectores se identificaron con base en sus características morfológicas. La identificación de Trypanosoma spp. en las heces de los triatominos se hizo mediante el examen directo por microscopía. Las láminas positivas se tiñeron con Giemsa y los parásitos se identificaron por sus características morfológicas. Resultados. Los índices entomológicos con los valores más elevados fueron la dispersión en centros poblados rurales del estado Sucre (16,67 %) y la colonización de las viviendas (33,33 %). Las especies de triatominos capturados fueron Rhodnius prolixus , Rhodnius pictipes , Rhodnius robustus , Triatoma maculata y Panstrongylus geniculatus , siendo T . maculata el principal vector en el domicilio. Conclusiones. A pesar del bajo índice de infección natural en vectores (1,72 %), la existencia de especies con éxito reproductivo en el domicilio y el peridomicilio puede garantizar el mantenimiento de la cadena epidemiológica, tanto de la enfermedad como del parásito.

Introduction: The ecological niche of Reduvidae vectors has been modified due to environmental changes and human encroachment into the rural areas. Objective: This study evaluates the current entomological indices of triatomines responsible for Trypanosoma cruzi infection in Sucre State, Venezuela. Materials and methods: A cross-sectional and prospective study was conducted in 95 towns and 577 dwellings in the 15 municipalities of the state of Sucre, Venezuela, from August to November, 2008. Triatomine bugs were identified on the basis of morphological characteristics, and their feces examined for T. cruzi infection through direct microscopy. Positive slides were stained with Giemsa and parasites were identified by morphologic characterization. Results: The entomological indices expressing the highest values were dispersion (16.67%) and household colonization (33.33%). The triatomine species captured were: Rhodnius prolixus , Rhodnius main intradomiciliaryvector. Conclusions: Despite the low index of vector infection (1.72%), the existence of species with domiciliary and peridomiciliary reproductive success ensures the persistence of the epidemiological chain both for the disease and the parasite.

Factores de riesgo asociados con el diagnóstico de miocardiopatía chagásica crónica en individuos seropositivos del estado Barinas, Venezuela / Risk factors associated with the diagnosis of chronic chagasic miocardiopathy in seropositive individuals from Barinas state, Venezuela

Se determinaron los factores de riesgo asociados al diagnóstico de miocardiopatía chagásica crónica (MChC) en 115 individuos seropositivos para anticuerpos anti-Trypanosoma cruzi, en el Estado Barinas, Venezuela. La seropositividad fue determinada mediante ELISA y MABA (Multiple Antigen Blot Assay) y el diagnóstico de MChC fue establecido mediante electrocardiografía y ecocardiografía. A cada individuo se le realizó una historia clínica completa que incluyó antecedentes epidemiológicos, antecedentes patológicos personales y familiares, y hábitos psicobiológicos; además se realizó una encuesta donde se interrogó acerca de factores de riesgo socioeconómicos, psicosociales y de hábitos alimentarios. Los factores de riesgo fueron establecidos mediante una regresión logística binaria. Los resultados mostraron que 81 (70,4%; IC95% = 66,4-74,4) pacientes reunían criterios para el diagnóstico de MChC, de los cuales 74 (64,4%; IC95% = 60,2-68,6) estaban en Fase II (6,1%; IC95% = 4,0-8,2) y 7 en Fase III, mientras que 34 (29,6%; IC95% = 25,5-33,5) estaban en Fase I. En el periodo de 1 año murieron 2 individuos en Fase III. El diagnóstico de MChC estuvo asociado con la práctica de la caza de animales silvestres, el consumo de chimó, antecedentes maternos de cardiopatía, antecedentes personales de hipertensión arterial y un ápex visible, como factores de riesgo, mientras que: el consumo de alimentos preservados y enlatados constituyó un factor de protección. En conclusión, el diagnóstico de MChC tiene una alta frecuencia en individuos seropositivos del estado Barinas y la prevención del desarrollo de insuficiencia cardíaca debe basarse en la atención médica precoz y en medidas educativas para controlar los factores de riesgo.

This study evaluates the risk factors associated with the diagnosis of chronic chagasic miocardiopathy (CChM) in 115 seropositive individuals to anti-Trypanosoma cruzi antibodies, in Barinas state, Venezuela. Serology was performed with ELISA and MABA; while the CChM diagnosis was established by electrocardiography and echocardiography. A complete clinical history including epidemiological, personal/familiar antecedents and psychobiological habits, plus socioeconomic, psychosocial and alimentary habits interviews were performed for each individual. Risk factors were determined through binary logistic regression. Results showed that 81 patients (70,4%; CI95% = 66.4-74.4) had criteria for CChM, of which 74 (64.4%; IC95% = 60.2-68.6) were in phase II; while 34 (29.6%; IC95% = 25.5-33.5) were in phase I of the disease and 7 (6.1%; IC95% = 4.0-8.2) in phase III. In a one year period, two patients in phase III died of heart failure. The diagnosis of CChM was associated with hunting practice, maternal history of cardiopathies, chewing chimó, medical history of hypertension and apex beat visible; it was negatively associated with canned and preserved foods ingest. In conclusion the CChM diagnosis has high frequency in seropositive individuals in Barinas and heart failure prevention must be based on an early medical attention and educative strategies in order to control risk factors.

Factores de riesgo asociadas a la enfermedad Chagas en comunidades rurales en Lara, Venezuela / Comparative analysis of risk factors associated with Chagas disease in Lara State, Venezuela

La reinfestación por vectores secundarios es un problema emergente para la transmisión de la enfermedad de Chagas. Objetivo: Realizar un análisis comparativo para determinar los factores de riesgo asociados a la seropositividad en humanos. Materiales y Métodos: Estudio ecoentomológico y seroepidemiológico realizado en dos comunidades del Estado Lara, infestadas por Triatoma maculata o Panstrongylus geniculatus. Resultados: Guariquito (bosque húmedo tropical templado intervenido para actividad agrícola) mostró una seroprevalencia (SP) canina del 33,33 % y humana del 6,81 % asociada a: menores de 40 años, vector en vivienda anterior, comer animales de caza, migración rural, reconocimiento y contacto con el vector, siendo factores protectores conocimiento del vector y haber vivido en ranchos; infestación 20,45 %, colonización 0 % e infección 18,75 %; ninfas capturadas en cuevas de Xenarthra, los cuales se encontraron infectados (20 %), al igual que Rodentias (25 %). Cauderales (región semidesértica): SP humana del 11,56 % asociada a: mayores de 40 años, vector en vivienda anterior tipo rancho, comer animales de caza, migración rural, reconocimiento y contacto con el vector, siendo factor protector presencia de caninos en la vivienda, los cuales fueron seronegativos; infestación 5,51 %, colonización 0 % e infección-vivienda 0 %; ninfas y Chiropteras no infectadas fueron capturadas en Cactáceas. Conclusión: Panstrongylus geniculatus es responsable de la transmisión reciente en regiones intervenidas de bosque tropical húmedo y con reservorios de los géneros Xenarthra y Rodentia; Tm tiene capacidad vectorial limitada debido a bajos índices de infección producto de sus fuentes de alimento.

Reinfestation by secondary vectors is an emerging problem for h g ’ i e e smission. Objective: To make a comparative analysis and to identify risk factors associated with human seropositivity. Methods: We have done and ecoentomological and seroepidemiologic study in two communities in Lara state, infested by Triatoma maculata or Panstrongylus geniculatus. Results: Guariquito (temperate rainforest, human intervened for agricultural activity) showed 33,33 % og’ e op ev le ce (SP) 6,81 % hum SP associated with: individuals under 40 years, vector infestation of previous house, eating hunting animals, rural migration, vector recognition or contact; protective factors were: knowledge about vectors and used to live in dwellings; 20,45 % infestation, 0% colonization and 18,75 % infection; nymphs were capture in Xenarthra caves, which were found infected (20 %), as well as Rodentias (25 %). Cauderales (semi-desert region) showed 11,56 % human SP associated with: individuals older than 40 years, vector presence in dwellings, eating wild animals, rural migration, recognition and vector contact; as protective factors presence of dogs in the house, which were seronegative; 5,51 % infestation, 0 % colonization or infection indexes; non-infected Chiropteras and Tm nymphs were captured in Cactaceae. Conclusion: Panstrongylus geniculatus is the vector responsible for recent transmission of Chagas disease in tropical rain forest regions, where human intervention is in evolution and reservoirs of genera Xenarthra and Rodentia are present, while Tm has a limited vector capacity because of their low rates of infection as consequence of their food sources.

Seroprevalencia de la infección por Trypanosoma cruzi en Canis familiaris del estado Sucre, Venezuela / Seroprevalence of T. cruzi infection in Canis familiaris, state of Sucre, Venezuela.

Introducción. En Venezuela, la infección por T. cruzi en humanos ha sido ampliamente estudiada; sin embargo, en reservorios ha sido menos abordada. El objetivo de este trabajo fue determinar la seroepidemiología de la infección por T. cruzi en perros en el estado Sucre, Venezuela. Materiales y métodos. Se llevó a cabo un estudio prospectivo transversal en 95 centros poblados y 577 viviendas de los 15 municipios del estado Sucre, Venezuela, entre agosto y noviembre de 2008. Los sueros se evaluaron con el estuche CruziELISA y la prueba de unión de múltiples antígenos (Multiple Antigen Binding Assay, MABA). Además, se aplicaron encuestas epidemiológicas para evaluar los factores de riesgo. Resultados. Se evaluaron 363 perros (edad promedio: 2,6 ± 2,2 años, 226 machos y 137 hembras). Con la combinación de las pruebas ELISA/MABA se detectaron 78 sueros positivos, 69 negativos y 10 resultados inconclusos. La seroprevalencia de la infección para T. cruzi en perros, en el estado Sucre fue de 22,1 % (IC95%: 20,58-22,4). No se encontró asociación estadística significativa entre la infección por T. cruzi en perros y las variables epidemiológicas evaluadas: perros cazadores, dormir al aire libre, deambular libremente por el centro poblado, sexo del animal y hábitos de alimentación. La infección por T. cruzi estuvo asociada a la edad de los perros, y fue significativamente mayor en el grupo de 0 a 3 años, en comparación con los perros mayores. Conclusiones. La alta seroprevalencia detectada en los perros muestra que en esta región de Venezuela existe un factor de riesgo importante de transmisión de este parásito a poblaciones humanas.

Introduction: Trypanosoma cruzi infection in humans has been extensively studied in Venezuela; however, in reservoirs it has been less investigated. Objective: The objective of this study was to determine the seroepidemiology of T. cruzi in the state of Sucre, Venezuela. Materials and methods: A cross-sectional and prospective study conducted in 95 towns and 577 dwellings in the 15 municipalies of the state of Sucre, Venezuela, from August to November, 2008. The evaluation of serum samples was performed with the CruziELISA kit and the multiple antigens binding assays (MABA). Furthermore, epidemiological surveys were applied to evaluate the risk factors. Results: A total of dogs (average age of 2, 6 + 2.2 years, 226 males and 137 females) was evaluated. The combination of the ELISA / MABA tests detected 78 positive sera, sixty-nine negative and 10 of inconclusive results. The seroprevalence of the T. cruzi infection in dogs in the state of Sucre, was 22.1% (CI 95%: 20.58-22.4%). No significant statistic association was found between the T. cruzi infection in dogs and the evaluated epidemiological variables: hunting dogs that slept oudoors roaming freely in the populated center, sex of the animal and eating habits. The T. cruzi infection was associated to the age of canines, being significantly higher in the group of 0 to 3 years, when compared with older dogs. Conclusions: The high T. cruzi seroprevalence dected in dogs shows that in this región of Venezuela there prevails an important risk factor of transmissibility of this parasite to human populations.

Electrocardiography repolarization abnormalities are characteristic signs of acute chagasic cardiomyopathy / Los trastornos de la repolarización ventricular son signos característicos de la cardiomiopatía chagásica aguda

Chagas disease is a tropical parasitic disease caused by the protozoan Trypanosoma cruzi (T. cruzi), whose reemergence as oral outbreaks is currently a public health problem in Venezuela. T. cruzi infection induces myocardial damage; which according to the microvascular theory, is derived from parasite-mediated disruption of the endothelium, inducing platelet aggregation and ischemia. In order to determine whether ventricular repolarization disorders observed in human patients are characteristic signs of the disease that can be reproduced in NMRI mice; we studied 12 patients with a well documented diagnosis of acute Chagas disease, based on epidemiological, clinical, parasitological and molecular data. Also, T. cruzi isolates from the blood of human patients from other Venezuelan geographical regions were characterized and inoculated in albino NMRI mice. A standard 12-lead and bipolar electrocardiogram configuration were done in human patients during the acute phase of the disease and in mice, after three weeks of infection. Results in human showed repolarization disorders, characterized by: negative, bimodal or biphasic T waves, ST segment depression or elevation and early repolarization. In mice a significant increase in T wave amplitude, increased QT interval duration and elevation or depression of ST segment were observed. These findings were evidenced in all infected mice, suggesting that electrocardiographic repolarization abnormalities in a well documented clinical and epidemiological context are signs that increase the sensitivity for the diagnosis of acute Chagas´ disease.

La enfermedad de Chagas es una hemoparasitosis causada por Trypanosoma cruzi (T. cruzi), cuya re-emergencia como epidemias por contaminación oral es actualmente un problema de salud pública en Venezuela. La infección por T. cruzi causa miocarditis; que de acuerdo con la teoría microvascular deriva del daño del endotelio vascular, al inducir agregación plaquetaria e isquemia. Con el objetivo de demostrar que los trastornos de repolarización son signos propios de la miocarditis chagásica aguda (MChA) reproducibles en modelos animales, estudiamos 12 pacientes humanos con diagnostico bien documentado de MChA, basado en datos epidemiológicos, clínicos, parasitológicos y moleculares. A partir de la sangre de los pacientes obtuvimos los aislados de T cruzi, los caracterizamos molecularmente y los inoculamos en ratones albinos NMRI; paralelamente, aislados de T cruzi provenientes de otras regiones de Venezuela fueron también ensayados. Tanto en los pacientes humanos como en los ratones con Chagas agudo, se realizaron estudios electrocardiográficos en 12 derivaciones estándares y en configuración bipolar, respectivamente. En humanos observamos trastornos de la repolarización ventricular caracterizados por: onda T negativa, bimodal o bifásica; elevación o depresión del segmento ST y despolarizaciones tempranas. En ratones observamos incrementos en la amplitud de la onda T, aumento en la duración del intervalo QT y elevación o depresión del segmento ST. Estos hallazgos fueron evidenciados en todos los ratones infectados con los diferentes aislados, sugiriendo que los trastornos de repolarización, en un adecuado y bien documentado contexto epidemiológico y clínico, son signos que aumentan la sensibilidad para el diagnóstico de MChA.

Persistence of Chagas disease active transmission among dogs in Venezuela rural community / Persistencia de la enfermedad de Chagas y trasmisión activa entre perros en una comunidad rural de Venezuela

Objective: To determine human and canine seroprevalence, entomologic indexes and risk factors for Chagas’ disease transmission in a rural community. Method: 48 houses, 162 people, and 55 canines were sampled. Serum anti-Trypanosoma cruzi antibodies were determined by means of ELISA and MABA techniques using recombinant antigens. Triatomine collection were carried out by passive search by community and an active/systematic house, T. cruzi infection was determined by direct microcopy. Results: 2,47% of the humans and 18.18% of the canines were positive to serum anti-T.cruzi antibodies. The triatomine bugs found was 98.24% and 1.76% Eratyrus mucronatus. Vector’s indexes were: 0 % vector infection, 18.75% indoor house infestation, 25% outdoor house infestation, 0% indoor house colonization, 83.33 % outdoor house colonization and 4.16% house co-infestation. We obtained an association between house triatomine infestation and visualization of wild animals in the house. Discussion: there are not vector transmission of Chagas disease in the community, however, high dog’s prevalence is related to their biological habits and behavior.

Objetivo: Determinar la seroprevalencia humana y canina del índice entomológico y factores de riesgo para la transmisión de la enfermedad de Chagas en una comunidad rural. Materiales y Método: Se incluyeron 48 casas, 162 personas, y se tomaron muestras de 55 caninos. se determinaron anticuerpos séricos anti-Trypanosoma cruzi mediante técnicas de ELISA y MABA, utilizando antígenos recombinantes. La recolección de triatominos se llevó a cabo mediante búsqueda pasiva sistemática en la comunidad y casas. La infección por T. cruzi se determinó mediante microscopia directa. Resultados: El 2,47 % de los humanos y 18,18 % de los caninos fueron positivos al suero anti-T.cruzi. Los triatominos encontrados fueron T. maculata (98,24 %) y Eratyrus mucronatus (1,76%). No hubo infección vectorial, el 18,75 % de infestación intradomiciliaria, 25 % de infestación extradomiciliaria, no hubo colonización intradomiciliar, el 83,33 % de colonización extradomiciliar y el 4,16 % de infestación intradomiciliar. Se obtuvo una asociación entre infestación intradomiciliar por triatominos y la visualización de los animales en la casa. Discusión: No se observo transmisión vectorial de la enfermedad de Chagas en la comunidad, sin embargo, la alta prevalencia en perros está relacionada con sus hábitos biológicos y el comportamiento.

Análisis morfométrico de Panstrongylus geniculatus de Caracas, Venezuela / Morphometric analysis of Panstrongylus geniculatus (Heteroptera: Reduviidae) from Caracas City, Venezuela

Introducción. En años recientes se han encontrado P. geniculatus infectados con Trypanosoma cruzi en ambientes rurales y urbanos de Caracas, Venezuela, lo que indica adaptaciones de dicha especie, considerada históricamente como silvestre, a ambientes artificiales. Objetivo. Determinar la presencia de dimorfismo sexual como indicador de adaptación al domicilio. Materiales y métodos. Mediante análisis generalizado de Procrustes y análisis elíptico de Fourier, se analizaron el tamaño isométrico y la conformación de alas, cabezas y pronotos de P. geniculatus capturados activa y pasivamente en domicilios en sectores urbanos de Altagracia y Petare de Caracas, y provenientes de ambientes rurales o silvestres de Sanare en el municipio Andrés Eloy Blanco en el estado Lara. Resultados. Se observó dimorfismo sexual al considerar el tamaño de las alas en los especímenes capturados en Sanare, las cuales fueron mayores en las hembras que los machos. Asimismo, las alas y cabezas de las hembras capturadas en Caracas fueron más pequeñas comparadas con las de las hembras provenientes de Sanare. No se encontraron diferencias significativas en cuanto a la conformación del pronoto. Conclusiones. Con base en el supuesto de que, por dimorfismo sexual, el tamaño es más reducido en triatominos domiciliados que en los silvestres, se concluye que P. geniculatus de Caracas están adaptados al domicilio, lo que constituye un factor de riesgo en la transmisión de la enfermedad de Chagas en dicha ciudad.

Introduction. In recent years, the assassin bug, Panstrongylus geniculatus, has been found infected with Trypanosoma cruzi in rural and urban areas of Caracas, Venezuela. Although historically this insect has been considered a forest species, it has become adapted to more urban artificial environments. Objective. The presence of sexual dimorphism was determined as an indicator of adaptation to domicilies. Material and methods. By Generalized Procrustes Analysis (GPA) and Elliptical Fourier Analysis (EFA), the isometric size and shape of wings, head and pronotums of P. geniculatus was assessed for actively and passively captured specimens. These were collected within domiciles in urban areas of Petare and Altagracia in Caracas City, and from rural or wild environments of Sanare in Andres Eloy Blanco in the state of Lara. Results. Sexual dimorphism was observed in the Sanare specimens, with female wings consistently larger than male wings. Similarly, female wings and heads from bugs captured in Caracas were smaller than those of female bugs captured in Sanare. No significative differences in the conformation of the pronotum were found between male and female bugs. Conclusions. Based on the assumption that the sexual dimorphism of bugs is reflected by smaller size in domesticated triatomines than in wild bugs, the conclusion is that Caracas P. geniculatus has become adapted to living indoors. This represents an additional risk factor for the Chagas disease transmission in Caracas.

Estudio seroepidemiológico y entomológico sobre la enfermedad de Chagas en un área infestada por Triatoma maculata (Erichson 1848) en el centro-occidente de Venezuela / An entomological and seroepidemiological study of Chagas' disease in an area in central-western Venezuela infested with Triatoma maculata (Erichson 1848)

En el presente trabajo se realizó un estudio seroepidemiológico, entomológico y de factores de riesgo para la infestación de las viviendas en un área infestada por Triatoma maculata (Parroquia Xaguas, Municipio Urdaneta, Estado Lara, Venezuela). Se muestrearon 140 viviendas, 509 personas y 110 cánidos, a los cuales se les determinó anticuerpos séricos anti-Trypanosoma cruzi mediante ELISA y MABA, utilizando antígenos recombinantes. La infección por Tr. cruzi de los triatominos fue determinada por microscopía óptica y PCR. Los resultados mostraron una seroprevalencia en humanos de 1,57 por ciento y en cánidos de 6,36 por ciento. De los 545 triatominos capturados 97,98 por ciento fueron T. maculata, 1,65 por ciento Eratyrus mucronatus y 0,37 por ciento Panstrongylus geniculatus; con índices vectoriales de infección 0,36 por ciento, infestación 16,4 por ciento, colonización 39,1 por ciento, coinfestación 8,6 por ciento y dispersión 100 por ciento. La presencia de vectores en el domicilio y peridomicilio estuvo asociada a la presencia de gallinas, desorden en el peridomicilio, caprinos, gallineros y/o distribución del domicilio. Los resultados permiten concluir que T. maculata es el vector predominante en la región, con capacidad de infestar y colonizar el domicilio y estaría involucrado en la transmisión de la enfermedad de Chagas.

This article presents a study on seroepidemiological, entomologic, and risk factors for domiciliary infestation in a circumscribed area infested with Triatoma maculata in Parroquia Xaguas, Urdaneta Municipality, Lara State, Venezuela. One hundred and forty households, 509 persons, and 110 dogs were sampled. Serum anti-Trypanosoma cruzi antibodies were determined by means of ELISA and MABA techniques using recombinant antigens. Tr. cruzi infection in the triatomines was determined by direct microscopy and PCR. According to the results, 1.57 percent of humans and 6.36 percent of dogs were positive for serum anti-Tr. cruzi antibodies. Triatomine species were: 97.98 percent T. maculata, 1.65 percent Eratyrus mucronatus, and 0.37 percent Panstrongylus geniculatus. Vector indices were: 0.36 percent vector infection, 16.4 percent household infestation, 39.1 percent household colonization, 8.6 percent household co-infestation, and 100 percent vector dispersion. Domiciliary and peridomiciliary infestation was associated with the presence of chickens and disorderly goat corrals, chicken coops, and domiciliary distribution. The results strongly suggest that T. maculata is the predominant Tr. cruzi vector in the area and that due to its capacity to infest and colonize human dwellings, it could be involved in Chagas' disease transmission.

Plasminogen interaction with Trypanosoma cruzi

The ability of Trypanosoma cruzi to interact with plasminogen, the zimogenic form of the blood serin protease plasmin, was examined. Immunohistochemistry studies revealed that both forms, epimastigotes and metacyclic trypomastigotes, were able to fix plasminogen in a lysine dependant manner. This interaction was corroborated by plasminogen activation studies. Both forms of the parasite enhanced the plasminogen activation by tissue-type plasminogen activator.The maximal enhancements obtained were 15-fold and 3.4-fold with epimastigotes and metacyclic trypomastigotes, respectively, as compared to plasminogen activation in absence of cells. Ligand-blotting analysis of proteins extracted with Triton X-114 from a microsomal fraction of epimastigotes revealed at least five soluble proteins and one hydrophobic protein able to bind plasminogen.

Estudio clínico de la efectividad de extractos alcaloideos obtenidos de los frutos del solanun americanum Miller sobre el herpes simplex herpes zoster y herpes genitalis / Clinic study of the affectiveness of alkaloids extracted of obtains of the fruts of the solanun americanum Miller on the herpes genitalis herpes zoster and herpes simplex

Una mezcla de Solanum alcaloides extraídos de Solanum americanum Miller, consiste principalmente de Solamargina y Solasodina, fue preparada sobre una base de crema hidrofólica y aplicado tópicamente a 46 pacientes de edades comprendidas entre 13 meses y 79 años, 34 de ellos con Herpes simplex, 9 con Herpes zoster y 3 con Herpes genitalis. Los pacientes con Herpes simplex, en un tratamiento de una duración máxima de 3 días obtuvieron una mejoría 24 horas después de la aplicación de la crema, con una sustancial disminución de prurito, el eritema y de las vesícula, mientras que los pacientes con Herpes zoster, en un tratamiento con una duración máxima de 10 días, presentaron una mejoría a las 24 horas, con aparición de costras a los 5 día y cicatrización a los 10 días. En el caso de los pacientes con Herpes genitalis se observó la desaparición de las lesiones en un tratamiento de un máximo de 5 días 91 por ciento de los pacientes con Herpes simplex tratados, no presentaron síntomas de recurrencia de la enfermedad después de 9 meses de iniciado el tratamiento. Ninguno de los 46 pacientes presentó efectos adversos

Obtención de clones de Trypanosoma cruzi a partir de epimastigotes y tripomastigotes sanguícolas delgados y gruesos en diferentes medios agarizados / Attainment of clones of Trypanosoma cruzi from this and thick sanguicolous trypomastigotes in different agar medium

Trypanosoma cruzi (cepa EP) presenta crecimiento clonal cuando es incorporado dentro del agar al 0,7% y en superficie al 0,8%. Las colonias fueron obtenidas a partir de un solo parásito y en un tiempo relativamente corto. La eficiencia de plaqueo fue variable y dependía del tipo de medio agarizado. Se obtuvo un máximo de eficiencia para el agar/LIT-BHI al 0,7% y para el agar/LIT-BHI-Sangre al 0,8%. Los tripomastigotes sanguícolas, tanto delgados como gruesos, fueron capaces de generar colonias a partir de parásitos únicos, con una eficiencia de plaqueo de 100%, superiores al 80% correspondiente a los epimastigotes provenientes de medio LIT